银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、bax的检测

关键词

银屑病、bcl-2基因、Fas基因、bax基因。

银屑病的发病机理尚不明确，角质形成细胞异常增生和角化不全是银屑病的主要病理改变，以往对这方面的研究主要集中在免疫学和生化学方面。近年来银屑病与细胞凋亡的关系逐渐受到越来越多学者的重视。国外有学者报道银屑病表皮中角质形成细胞凋亡异常增多。抑凋亡基因bcl-2和促凋亡基因Fas、bax是现今研究较多、较重要的几个细胞凋亡相关基因。为了探讨这几种基因在银屑病发病中的意义，我们采用免疫组化方法检测了银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas及bax。

1材料和方法

1．1标本来源：采用1994-1997年我院保存的石蜡包埋组织块。寻常型银屑病15例，其中男8例，女例；年龄11-68岁，平均年龄29.13岁；均为进行期银屑病。6名正常人皮肤组织，皆取自皮肤外科行重睑术、面部美容切除术者的皮肤，石蜡包埋作为对照组。测定前先将石蜡包埋组织块作常规组织切片及HE染色，在光镜下核对诊断，证实其病理诊断无误方采用。

1．2试剂：鼠抗人bcl-2单克隆抗体购自Dako公司，生物素化羊抗鼠单克隆抗体系华美生物制品公司产品。兔抗人Fas多抗、兔抗人bax多抗及链酶亲和素-生物素-过氧化酶复合物免疫组化试剂盒（简称SABC试剂盒）均购自武汉博士德生物工程公司。

1．3方法：载玻片用APES处理后干燥备用，切取4-5μm厚的石蜡切片，常规脱蜡水化。Bcl-2基因的检测参照ABC法稍加改进，阳性对照为正常淋巴结，阴性对照为不加一抗。Fas、bax基因的检测采用SABC法，阳性对照分别为武汉博士德生物工程公司提供的Fas、bax基因阳性对照片，阴性对照为不加一抗。

1．4判断：显微镜下观察，棕黄色为阳性结果。阳性强度判断标准如下：强阳性（+++）指50%以上细胞阳性染色；中等强度阳性（++）指25%-50%细胞阳性染色；弱阳性（+）指25%以下细胞阳性染色；阴性（-）指细胞均无任何阳性染色。

2结果

6例正常人皮肤组织中：bcl-2基因除部分基底细胞呈阳性反应外，余阴性。、Fas和bax基因为阴性表达。15例银屑病组织中：bcl-2基因在15例表皮增生的角质形成细胞中均呈阴性表达，但14例部分基底细胞和浸润的淋巴细胞呈阳性染色；Fas基因在12例银屑病组织中呈阳性表达；bax基因在13例中呈阳性，阳性染色遍布表皮各层角质形成细胞中及真皮浅层浸润的淋巴细胞上。在缺少一抗的对照反应中结果均为阴性，而作为阳性对照的正常淋巴结及Fas、bax基因阳性对照片则呈广泛强阳性染色。

3讨论

bcl-2基因最早是1984年Tsujimoto等从滤泡性淋巴瘤中分离出来的一种癌基因，位于18q21位点的bcl-2基因移至免疫球蛋白重链基因14q32位点附近，造成bcl-2蛋白的异常表达。bcl-2基因可抑制许多因素引起的细胞凋亡，故称为：“细胞凋亡抑制基因”。Fas抗原又称Apo-1或CD95，Fas分子是个典型的Ⅰ型膜蛋 白，属肿瘤环死因子（TNF）/神经生长因子（NGF）受体家族中的一员。研究发现Fas单克隆抗体在体内体处与Fas结合后均能导致表达Fas的细胞发生凋亡，从而证明Fas是一种识别Fas配体，并将凋亡信息传递给细胞的细胞表面受体，故Fas基因又称“凋亡基因”。Bax基因属于bcl-2基因家族成员，其功能与bcl-2基因相反，为促凋亡基因，bax蛋白可与bcl-2蛋白形成异源二聚体，从而抑制bcl-2基因的抗凋亡作用。我们的实验中正常的皮肤组织部分基底细胞bcl-2基因呈阳性反应，这与国外学者的报道相符合，有文献报道这些阳性细胞为黑素细胞，正常表皮中黑素细胞与基底角质形成细胞的比例为1：30，提示黑素细胞死亡和再生的控制是非常严格的。黑素细胞bcl-2基因强阳性表达，这可能与保护它们避免受内外环境的影响如紫外线的照射，减少凋亡有很大关系。在银屑病中除黑素细胞和浸润的淋巴细胞为阳性外，表皮增生的角质形成细胞均为阴性，这提示bcl-2基因可能在银屑病中所起的作用不大。目前认为在这类丘疹鳞屑性疾病中主要是bcl-X基因起作用。Wrone-Smith等及Foreman等发现银bcl-X1基因在增生的角质形成细胞上呈强阳性表达，认为bcl-X1基因可能通过抑制表皮细胞上呈强阳性表达，认为bcl-X1基因可能通过抑制表皮细胞凋亡，从而延长细胞的存活期。而本实验中银屑病组织促凋亡基因Fas、bax均为广泛性表达，这与国外学者的结论一致。因此，我们认为在银屑病中促凋亡基因Fas、bax起重要作用，而抑凋亡基因bcl-2作用可能不大。